大鼠MIS/AMH ELISA试剂盒使用说明书

产品概述

大鼠MIS/AMH（缪勒管抑制物质/抗缪勒管激素）ELISA试剂盒是一种用于定量检测大鼠血清、血浆或细胞培养上清液中MIS/AMH含量的固相酶联免疫吸附测定试剂盒。本试剂盒采用双抗体夹心法原理，具有高灵敏度、高特异性和良好的重复性，操作简便，适合科研使用。

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法。在微孔板上预包被有大鼠MIS/AMH特异性捕获抗体。样品或标准品中的大鼠MIS/AMH会与捕获抗体结合。洗涤后，加入生物素标记的检测抗体，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”复合物。再次洗涤后，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素。最后加入底物TMB进行显色。颜色的深浅与样品中大鼠MIS/AMH的浓度成正比。通过酶标仪测定吸光度值，绘制标准曲线，即可计算出样品中MIS/AMH的浓度。

主要组分（以96孔板规格为例）

1. 预包被微孔板：1块（96孔，可拆卸）
2. 大鼠MIS/AMH标准品：冻干粉或液体，浓度梯度已知
3. 标准品/样品稀释液：1瓶
4. 生物素标记的检测抗体：1瓶
5. HRP标记的链霉亲和素：1瓶
6. 浓缩洗涤液（20X）：1瓶
7. TMB底物溶液：1瓶
8. 终止液：1瓶
9. 封板膜：若干
10. 产品说明书：1份

注意： 具体组分与浓度请以收到试剂盒内的实际清单为准。部分组分需根据说明书要求进行稀释或复溶。

样品收集与处理

• 血清： 使用不含抗凝剂的采血管收集血液，室温静置30分钟，待其自然凝固后，1000×g离心15分钟，小心吸取上清液（血清）进行检测或分装冻存于-20℃以下。避免反复冻融。
• 血浆： 使用EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂。采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，收集上清液（血浆）。
• 细胞培养上清液： 直接离心取上清检测。若样品中待测物浓度过高，请用标准品/样品稀释液进行适当稀释。

操作步骤（简要流程）

1. 准备： 将所有试剂和样品恢复至室温（约20-25℃）。配制好所需浓度的标准品，并用稀释液按预定倍数稀释待测样品。用去离子水或蒸馏水将20X浓缩洗涤液稀释成1X工作液。
2. 加样： 分别设置空白孔、标准品孔和样品孔。向相应孔中加入100μL标准品或已稀释的样品。轻轻混匀，贴上封板膜，37℃孵育90分钟。
3. 加检测抗体： 弃去孔内液体，每孔加入350μL 1X洗涤液，静置30秒后弃去，在吸水纸上拍干。重复洗涤3次。每孔加入100μL生物素标记的检测抗体工作液。贴上新的封板膜，37℃孵育60分钟。
4. 加酶结合物： 重复步骤3的洗涤过程。每孔加入100μL HRP标记的链霉亲和素工作液。贴上封板膜，37℃避光孵育30分钟。
5. 显色： 重复洗涤步骤5次。每孔加入90μL TMB底物溶液，37℃避光孵育15-20分钟。密切观察颜色变化。
6. 终止与测定： 每孔加入50μL终止液，此时蓝色立即转为黄色。在30分钟内，用酶标仪测定各孔在450nm波长处的吸光度（OD值），建议使用双波长测定，校正波长设为630nm。

结果计算

1. 计算每个标准品和样品的平均OD值，减去空白孔的平均OD值（若有）。
2. 以标准品的浓度为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴），在坐标纸上或使用软件绘制标准曲线。推荐使用四参数逻辑（4-PL）曲线拟合以获得最佳结果。
3. 根据样品的OD值，从标准曲线上查出对应的浓度，再乘以样品稀释倍数，即为样品中大鼠MIS/AMH的实际浓度。

注意事项

1. 本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床诊断。
2. 不同批号的试剂盒组分不可混用。
3. 请严格按照说明书操作，孵育时间、温度、洗涤次数均对结果有影响。
4. 避免TMB底物接触氧化剂和金属物。终止液为酸性溶液，操作时请小心。
5. 样品应清澈，溶血、高脂或严重污染的样品可能影响检测结果。
6. 所有样品、废弃物均应视为潜在生物危害物进行处理。

保存条件与有效期

未使用的试剂盒应储存于2-8℃。部分液体组分（如酶结合物、检测抗体）可根据说明书建议分装冻存于-20℃以下以延长保存时间。避免反复冻融。有效期通常为12个月，具体日期见外包装标签。

供应信息

本品可通过中国环保设备展览网等平台商机板块查询供应商信息。具体价格、现货/订货状态、发货方式等请直接咨询相关供应商。

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声明： 本说明书内容基于通用ELISA原理及典型操作编写，具体操作请务必以您所购试剂盒内附的官方说明书为准。